體外培養的細胞與體內細胞一樣，需要在合適的溫度和pH下生存。培養工作既可在培養箱(culture incubator)中進行，也可在控溫溫室中進行，若一或兩臺培養箱就能滿足需要，那么用培養箱是相對經濟且節省空間的最好途徑。常用的培養箱包括電熱恒溫培養箱、濕式CO2培養箱和厭氧培養箱。
1.電熱恒溫培養箱
培養箱要具有較高的溫度靈敏度。一般選購隔水式或晶體管式控溫培養箱，該培養箱靈敏度高，溫度控制較恒定。根據工作原理可將電熱恒溫培養箱分為隔水式和氣套式兩種。電熱恒溫培養箱價格較便宜，但只適于細菌培養和封閉式細胞培養，并常用于有關細胞培養器材和試劑的預溫和恒定。
2.CO2培養箱
CO2培養箱是細胞培養水平提高和培養器皿多樣化后提出的高要求產物，它除有恒溫培養箱的性能外，還能夠恒定供應細胞培養時所需要的CO2（一般濃度5%），維持培養液酸堿度穩定，適于開放或半開放培養。此外，還具有殺菌、安全等其他完善的輔助功能，故在動物細胞培養、病毒增殖、細菌培養中被廣泛采用。CO2培養箱種類繁多，根據工作原理，可分為氣套式CO2培養箱、水套式CO2培養箱、紅外CO2培養箱、高溫滅菌培養箱、光照低溫培養箱、恒溫恒濕培養箱等。CO2培養箱價格較貴，但使用方便，CO2分壓和溫度容易控制。CO2濃度通過CO2檢測裝置控制，空氣通過自然對流在培養箱內循環，以保持CO2水平和溫度均一。當使用不透氣瓶蓋培養瓶時，可將瓶蓋稍微旋松，使之與外界保持通氣狀態，因此培養箱內空氣必須保持清潔。為避免污染，要定期用紫外線燈照射或者75%乙醇擦拭對培養箱進行消毒。另外，要維持箱內溫度、濕度恒定，可用無菌蒸餾水定期注入外箱內，或將無菌潮濕的紗布置于托盤內，然后放入CO2培養箱，使箱內始終保持穩定的相對濕度，防止培養液蒸發而影響細胞的生長。
培養箱大小的選擇由使用人數和培養物類型決定。當多人同時進行細胞培養時，可以選用一個中型培養箱（可同時放置1 000個細胞培養板，或存放完成10次實驗所需要的培養物）。若人員較少，則一臺小型培養箱就可滿足需要。CO2培養箱，特別是有加濕器的CO2培養箱必須經常清洗。所以，內部應易于拆卸，不留難以清潔的縫隙和死角。培養物從培養箱取到潔凈臺或其他無菌臺使用時，應用酒精擦拭培養瓶、培養皿或裝它們的箱子，然后再進行下一步操作。
